酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)是指將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上，進(jìn)行免疫反應(yīng)從而對(duì)液體生物標(biāo)本中微量物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定的定性和定量方法。

檢測(cè)原理：

1、使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。

2、使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入反應(yīng)底物后，底物被酶催化轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

ELISA檢測(cè)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、樣本量少等特色，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高,重復(fù)性好，在臨床及科研的抗原抗體檢測(cè)及病原體檢測(cè)方面得到了廣泛的使用。目前市面上ELISA試劑盒品牌駁雜，檢測(cè)指標(biāo)種類(lèi)、別名繁多，產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，我們應(yīng)該怎么挑選適用的ELISA試劑盒產(chǎn)品呢？有哪些指標(biāo)是需要我們考慮的呢？

首先，客戶(hù)需要明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖亲霭袠?biāo)功能性測(cè)定還是含量檢測(cè)。功能性測(cè)定一般是酶及底物的反應(yīng)，對(duì)生物活性的分析。而Elisa專(zhuān)用于靶標(biāo)分子的含量檢測(cè)。

其次，如果所研究指標(biāo)為蛋白質(zhì)或多肽，可以到Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.uniprot.org/)查詢(xún)對(duì)應(yīng)的的Uniprot ID，在選擇產(chǎn)品時(shí)同時(shí)核對(duì)指標(biāo)名和Uniprot ID；如果所研究指標(biāo)為小分子半抗原，此類(lèi)化學(xué)物質(zhì)可以到ChemSpider化學(xué)品庫(kù)(http://www.chemspider.com)查詢(xún)對(duì)應(yīng)的CAS號(hào)，結(jié)合CAS號(hào)選擇需要的產(chǎn)品。

  然后，我們還需要根據(jù)已有文獻(xiàn)查詢(xún)或預(yù)判靶標(biāo)在生物樣本中的有無(wú)或含量區(qū)間，針對(duì)性選擇靈敏度足夠的試劑盒，同時(shí)和廠商確認(rèn)試劑盒的適用樣本是否包含客戶(hù)自己的實(shí)驗(yàn)樣本。

  在此基礎(chǔ)上，如果客戶(hù)有多種品牌的同類(lèi)產(chǎn)品可以選擇，還應(yīng)比較試劑盒產(chǎn)品的多項(xiàng)性能參數(shù)，包括靈敏度、特異性、精密性、準(zhǔn)確度、線性、穩(wěn)定性、天然樣本數(shù)據(jù)。這些參數(shù)是ELISA作為一種人為建立的微量分析方法為確保其有效性和可信度所必須考量的內(nèi)在固有的特性。

1、靈敏度(sensitivity)—試劑盒對(duì)于被檢物質(zhì)的最低檢測(cè)能力，如果我們待檢物質(zhì)濃度量很低，可以選擇高靈敏的試劑盒。靈敏度取值為空白對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)差對(duì)應(yīng)的濃度值的3倍。

FineTest擁有獨(dú)特的信號(hào)放大專(zhuān)利技術(shù)，能靈活調(diào)整試劑盒的靈敏度，最高可將靈敏度提高到fg級(jí)別，并有能力提高客戶(hù)樣品檢出率。

2、特異性(Specificity)—判斷其他分子與試劑盒抗體的結(jié)合能力。交叉反應(yīng)越小，試劑盒的特異性越好。一般需要衡量試劑盒與當(dāng)前種屬同家族蛋白和其它種屬該蛋白、血清中常見(jiàn)因子(如異嗜性抗體、類(lèi)風(fēng)濕性因子等)、靶蛋白互作蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。為保證試劑盒特異性，FineTest主要有這3方面的努力：

2.1、從原料上精選單克隆抗體和多克隆抗體對(duì)；

2.2、從反應(yīng)溶液體系上優(yōu)化包被緩沖液、樣本稀釋液和抗體稀釋液來(lái)抵抗基質(zhì)效應(yīng)；

2.3、從測(cè)定物本身特性?xún)?yōu)化，天然抗原和重組蛋白抗原與捕獲抗體結(jié)合力的強(qiáng)弱由于結(jié)合后蛋白構(gòu)象的改變而不同進(jìn)而會(huì)影響檢測(cè)值的區(qū)別。

3、精密性(Precision)—也叫重復(fù)性，是對(duì)同一樣品重復(fù)測(cè)定時(shí)誤差大小的評(píng)估參數(shù)。一般要求板間及板內(nèi)精密性控制在10%以?xún)?nèi)。

FineTest使用全機(jī)器生產(chǎn)，排除人工的不穩(wěn)定性，依靠電子移液槍和自動(dòng)包板機(jī)精確加樣，嚴(yán)格控制批內(nèi)差批間差。

4、準(zhǔn)確度(Recovery ) —一般通過(guò)加標(biāo)(spike-in)回收率來(lái)衡量，回收率在80%-120%之間為合格。通過(guò)添加標(biāo)準(zhǔn)品到天然樣本機(jī)制內(nèi)進(jìn)行測(cè)定，以不添加標(biāo)準(zhǔn)品的天然樣本基質(zhì)為空白對(duì)照，回收率數(shù)值為靶標(biāo)的測(cè)定濃度與添加的標(biāo)準(zhǔn)品濃度比值，以百分比計(jì)。回收率偏高或偏低會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，影響測(cè)定值的準(zhǔn)確性。

5、線性度(Linearity ) —在天然樣本基質(zhì)中添加有適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，分別稀釋2倍、4倍、8倍來(lái)檢測(cè)，測(cè)定各濃度下的回收率，回收率在80%-120%之間為合格。

6、穩(wěn)定性(Stability ) —一般以加速破壞性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，將未拆封的試劑盒在37℃和2-8℃分別放置一定時(shí)間，考察各項(xiàng)性能指標(biāo)的偏差，以偏差小于10%為合格。穩(wěn)定性越好，試劑盒存儲(chǔ)時(shí)間越長(zhǎng)。

FineTest自主開(kāi)發(fā)的穩(wěn)定系統(tǒng)可以讓試劑盒在40度的環(huán)境下存放一周，活性不低于95%。大部分試劑盒可以在4度存放兩年活性依然能保持85-95%?；静挥绊懺噭┖泄ぷ骱徒Y(jié)果的準(zhǔn)確性。

7、天然樣本檢測(cè)

  最后，還應(yīng)明確試劑盒可以檢測(cè)天然樣本及合適的樣本類(lèi)型。根據(jù)靶點(diǎn)性質(zhì)預(yù)判適合檢測(cè)的樣本，并實(shí)際檢測(cè)該類(lèi)樣本數(shù)量達(dá)到5例以上，在客戶(hù)需要時(shí)提供一定的樣本含量數(shù)據(jù)參考。在市場(chǎng)上，根據(jù)國(guó)內(nèi)外各大科研院所科研人員和行業(yè)內(nèi)廣大廠家的共識(shí)，ELISA試劑盒通常被分為低端、中端和高端三類(lèi)，一般也是用這七項(xiàng)性能參數(shù)來(lái)區(qū)分的。優(yōu)秀的ELISA試劑盒產(chǎn)品將極大地促進(jìn)我們實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，幫助我們拿到珍貴可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。